10x TBE elektroforezės buferio protokolas arba receptas

TBE ir TAE yra naudojami kaip buferiai molekulinėje biologijoje, visų pirma elektroforezė nukleorūgščių. Tris buferiai naudojami šiek tiek pagrindinėmis pH sąlygomis, kaip ir DNR elektroforezei, nes tai sulaiko DNR tirpsta tirpale ir pašalinamas protonai, todėl jis bus pritrauktas prie teigiamo elektrodo ir migruos per gelis. EDTA yra tirpalo sudedamoji dalis, nes tai dažna kompleksonatas apsaugo nukleorūgštis nuo fermentų skilimo. EDTA sudaro cheminius dvivalenčius katijonus, kurie yra nukleazių, galinčių užteršti mėginį, kofaktoriai. Kadangi magnio katijonas yra DNR polimerazės ir restrikcijos fermentų kofaktorius, EDTA koncentracija palaikoma tikslingai maža (maždaug 1 mM koncentracija).

Jums nereikia sterilizuoti tirpalo. Nors krituliai gali susidaryti po tam tikro laiko, pradinis tirpalas vis tiek yra naudojamas. Galite sureguliuoti pH naudodami pH matuoklį ir lašindami įpilkite koncentruoto druskos rūgštis (HCl). TBE buferį laikyti kambario temperatūroje yra puiku, nors jūs galite norėti filtruoti pradinį tirpalą per 0,22 mikrono filtrą, kad būtų pašalintos dalelės, kurios paskatintų kritulius.

instagram viewer

Jei atsitiktinai naudosite 5X arba 10X pradinį tirpalą, rezultatai bus prasti, nes bus sukaupta tiek pat šilumos. Be to, kad pavyzdys bus prastas, jis gali būti sugadintas.

Nors TBE ir TAE yra įprasti elektroforezės buferiai, yra kitos galimybės mažo molaiškumo laidiems tirpalams, įskaitant ličio borato buferį ir natrio borato buferį. TBE ir TAE problema yra ta, kad Tris pagrindu sukurti buferiai riboja elektrinį lauką, kurį galima naudoti atliekant elektroforezę, nes per didelis krūvis sukelia bėgančią temperatūrą.