Fosfato buferinis tirpalas arba PBS tirpalas

PBS arba fosfatinis buferis druskos yra buferinis tirpalas tai ypač vertinga, nes imituoja jonų koncentraciją, osmoliškumą ir žmogaus kūno skysčių pH. Kitaip tariant, tai izotoninis sprendimas žmonėms, todėl atliekant biologinius, medicininius ar biocheminius tyrimus, mažiau tikėtina, kad jis sukels ląstelių pažeidimą, toksiškumą ar nepageidaujamą kritulį.

Yra keletas receptų, kaip paruošti PBS tirpalą. Pagrindiniame tirpale yra vandens, natrio vandenilio fosfato ir natrio chloridas. Kai kuriuose preparatuose yra kalio chlorido ir kalio dihidrofosfato. EDTA taip pat gali būti pridedama ruošiant ląstelėse, kad būtų išvengta gumulėlių.

Fosfato buferinis tirpalas nėra idealus skirti naudoti tirpaluose kuriuose yra dvivalenčiai katijonai (Fe²⁺, Zn²⁺), nes gali būti kritulių. Tačiau kai kuriuose PBS tirpaluose yra kalcio arba magnio. Be to, atminkite, kad fosfatas gali slopinti fermentines reakcijas. Ypač žinokite apie šį galimą trūkumą dirbdami su DNR. Nors PBS yra puikus fiziologijos mokslas, žinokite, kad fosfatas, esantis PBS buferiniame tirpale, gali susikaupti, jei mėginys maišomas su etanoliu.

Tipiškos 1X PBS cheminės sudėties galutinė koncentracija yra 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl ir 2,7 mM KCl. Štai galutinė reagentų koncentracija tirpale:

Priklausomai nuo jūsų tikslo, galite paruošti 1X, 5X arba 10X PBS. Daugelis žmonių tiesiog perka PBS buferines tabletes, jas ištirpina distiliuotame vandenyje ir, jei reikia, sureguliuoja pH su druskos rūgštimi arba natrio hidroksidas. Tačiau nesunku padaryti sprendimą nuo nulio. Čia yra 1X ir 10X fosfatų buferinio tirpalo receptai:

1. Ištirpinkite reagento druskas 800 ml distiliuoto vandens.
2. Naudodami druskos rūgštį, sureguliuokite pH iki norimo lygio. Paprastai tai yra 7,4 arba 7,2. PH matavimui naudokite pH matuoklį, o ne pH popierių ar kitą netikslų metodą.
3. Įpilkite distiliuoto vandens, kad galutinis tūris būtų 1 litras.

Sterilizacija kai kurioms reikmėms nėra būtina, tačiau jei ją sterilizuojate, ištirpinkite tirpalą į alikvotines dalis ir 20 minučių autoklavinkite esant 15 psi (1,05 kg / cm).²) arba naudokite sterilizaciją filtru.

Fosfato buferinis tirpalas gali būti laikomas kambario temperatūroje. Jis taip pat gali būti šaldytas, tačiau gali būti 5X ir 10X tirpalai nuosėdos atvėsus. Jei turite atšaldyti koncentruotą tirpalą, pirmiausia laikykite jį kambario temperatūroje, kol įsitikinsite, ar druskos visiškai ištirps. Jei iškrenta kritulių, atšilus temperatūrai, jie vėl ištirps. Šaldyto tirpalo tinkamumo laikas yra 1 mėnuo.

10X yra koncentruotas arba pradinis tirpalas, kuris gali būti praskiedžiamas, norint gauti 1X arba normalų tirpalą. 5X tirpalas turi būti praskiedžiamas 5 kartus, kad būtų normalus skiedimas, o 10X tirpalas turi būti skiedžiamas 10 kartų.

Norėdami paruošti 1 litro darbinį 1X PBS tirpalą iš 10X PBS tirpalo, įpilkite 100 ml 10X tirpalo į 900 ml vandens. Tai keičia tik tirpalo koncentraciją, o ne gramų arba molinį reagentų kiekį. PH neturėtų būti keičiamas.

Kitas populiarus buferinis tirpalas yra „Dulbecco“ fosfatinis buferinis tirpalas arba DPBS. DPBS, kaip ir PBS, naudojamas biologiniams tyrimams ir buferiams, kurių pH yra 7,2–7,6. Galima laikyti kambario temperatūroje. Dulbecco tirpale yra mažesnė fosfato koncentracija. Tai yra 8,1 mM fosfato jonai, o įprastas PBS yra 10 mM fosfato. 1x DPBS receptas yra:

Druskas ištirpinkite 800 ml vandens. Naudodami druskos rūgštį, sureguliuokite pH iki 7,2 iki 76. Vandeniu sureguliuokite galutinį tūrį iki 1000 ml. Autoklavas 20 minučių 121 ° C temperatūroje.

• Dulbecco, R.; et al. (1954). "Apnašų susidarymas ir grynų linijų išskyrimas poliomielito virusais". Dž. Tinka Med. 99 (2): 167–182.
• „Fosfato buferinis tirpalas (PBS.)„ Cold Spring Harbor Protocols “(2006). Šaltojo pavasario uosto laboratorinė spauda.