Fosfato buferinis tirpalas (PBS) yra buferinis tirpalas dažniausiai naudojamas imunohistocheminiam (IHC) dažymui ir dažnai naudojamas biologiniuose tyrimuose. PBS yra vandens pagrindu pagamintas druskos tirpalas, kuriame yra natrio vandenilio fosfato, natrio chlorido ir kai kuriais atvejais kalio chlorido ir kalio dihidrogeno fosfato.
Imunohistocheminis dažymas
Imunohistochemija reiškia antigenų, tokių kaip baltymai, aptikimo procesą ląstelėse audinių pjūvis, naudojant antikūnų, jungiančių specifinius biologinius antigenus, principą audinius. Pirmasis imunohistocheminis dažymo metodas buvo imunofluorescencinis dažymas.
Antigenai tampa matomi konjuguojant su antikūnais, naudojant fluorescencinius dažus, dėl antigeno ir antikūnų surišimo reakcija. Šis procesas vyksta, kai jį įjungia jaudinanti tam tikro bangos ilgio šviesa fluorescenciniu mikroskopu.
Tirpalų osmoliškumas ir jonų koncentracijos sutampa su žmogaus kūnu - jie izotoniniai.
PBS buferio receptas
PBS galite paruošti keliais būdais. Yra kelios formulės. Kai kuriuose iš jų nėra kalio, o kituose - kalcio arba magnio.
Šis receptas yra gana lengvas. Jis skirtas 10X PBS pradiniam tirpalui (0,1M). Tačiau taip pat galite pasigaminti 1X pradinį tirpalą arba pradėti nuo šio 10X recepto ir praskiesti iki 1X. Visas procesas užtrunka apie 10 minučių, taip pat yra galimybė pridėti Tween.
Ko jums reikės norint sukurti PBS buferį
- Vienbazis natrio fosfatas (bevandenis)
- Dvibazis natrio fosfatas (bevandenis)
- Natrio chloridas
- Skaldykite ir pasverkite valtis
- Magnetinis maišiklis ir maišymo juosta
- Kalibruotas pH zondas ir tinkami sprendimai pH sureguliavimui
- 1L matavimo kolba
- Tween 20 (neprivaloma)
Kaip padaryti PBS buferį
- Pasverkite 10,9 g bevandenio natrio fosfato (Na2HPO4), 3,2 g bevandenio natrio fosfato vienaląsčio (NaH2PO4) ir 90 g natrio chlorido (NaCl). Ištirpinkite vos 1 l distiliuoto vandens.
- Nustatykite pH iki 7,4 ir praskieskite tirpalą iki 1 l galutinio tūrio.
- Prieš naudojimą praskieskite 10X ir, jei reikia, sureguliuokite pH.
- Galite pagaminti PBS tirpalą, kuriame būtų 0,5 procento Tween 20, įpildami 5 ml Tween 20 į 1L tirpalą.
PBS buferio gaminimo patarimai
Paruošę PBS tirpalą, laikykite buferį kambario temperatūroje.
Nevandeniniai reagentai gali būti pakeisti, tačiau jūs turėsite perskaičiuoti atitinkamą kiekvieno reagento masę, kad tilptų pridėtos vandens molekulės.
PBS buferio naudojimo būdai
Fosfato buferinis druskos tirpalas naudojamas daug, nes jis yra izotoninis ir netoksiškas daugumai ląstelių. Jis gali būti naudojamas medžiagoms skiesti ir dažnai naudojamas ląstelių talpykloms skalauti. PBS gali būti naudojamas kaip skiediklis įvairiais būdais išdžiovinti biomoleules, nes jame esančios vandens molekulės bus sukonstruotos aplink medžiagą - pavyzdžiui, baltymą. Jis bus "išdžiovinamas" ir imobilizuotas ant kieto paviršiaus.
PH išlieka pastovus ir pastovus, kad būtų išvengta ląstelių sunaikinimo.
Plona vandens plėvelė, jungianti medžiagą, apsaugo nuo denatūracijos ar kitų konformacijos pokyčių. Tuo pačiu tikslu gali būti naudojami karbonato buferiai, tačiau mažesnis efektyvumas.
PBS taip pat gali būti naudojamas matuojant etaloninį spektrą baltymas adsorbcija elipsometrijoje.