RFLP ir DNR analizės programos

Restrikcijos fragmentų ilgio polimorfizmas (RFLP) yra molekulinis genetinės analizės metodas, leidžiantis identifikuoti asmenis pagal unikalius restrikcijos fermentas pjaustymas tam tikruose DNR regionuose.

Taip pat vadinama RFLP analize, technika pasinaudoja polimorfizmai atskirų žmonių genetiniuose koduose. Nors visi rūšies nariai iš esmės turi tą pačią genetinę struktūrą, šie nedideli skirtumai lemia fenotipo, pavyzdžiui, išvaizdos ar metabolizmo, skirtumus tarp individų.

RFLP analizės metodas apima tam tikro regiono išpjaustymą DNR su žinomu kintamumu, su restrikcijos fermentais, tada atskiriant DNR fragmentus agarozės gelio elektroforezės būdu ir nustatant fragmentų skaičių bei santykinį dydį.

Restrikcijos fermentas yra fermentas, baltymo molekulė, kuris pjauna DNR restrikcijos vietose. Iš esmės DNR mėginys yra suskaidomas ir suardomas restrikcijos fermentų pagalba. Gauti fragmentai yra atskirti pagal ilgį, o fragmentų dydžiai skiriasi kiekvienam ištirtam asmeniui.

Visam RFLP procesui reikalingas zondo žymėjimas, DNR suskaidymas, elektroforezė, blotinimas, hibridizavimas, plovimas ir autoradiografija. Aptikta RFLP vizualizuojama naudojant rentgeno juostą autoradiografijoje, kur DNR fragmentus galima apžiūrėti ir analizuoti po to, kai jie yra atskirti vienas nuo kito elektroforezės būdu.

Kai kurios RFLP analizės programos apima:

• DNR pirštų atspaudai: Teismo medicinos mokslininkai gali naudoti RFLP analizę įtariamiesiems nustatyti, remiantis įrodymų pavyzdžiais, surinktais nusikaltimų vietose.
• Tėvystė: RFLP taip pat naudojamas nustatant tėvystę arba sekti protėvius.
• Genetinė įvairovė: Šis metodas gali būti naudojamas tiriant laukinės gamtos evoliuciją ir migraciją, tiriant gyvūnų populiacijos veisimosi modelius ir nustatant bei diagnozuojant tam tikras ligas.

RFLP genomo variacijų nustatymo metodas yra gyvybiškai svarbi priemonė genomo kartografavimui ir genetinių ligų analizei. Jei ieškoma tam tikros ligos geno vietos tam tikroje chromosomoje, tada tyrėjai tai darytų išanalizuoti šeimos, sergančios šia liga, DNR, tada ieškoti panašių paveldėjimo modelių RFLP alelių.

Nustačius ligos geną, atlikus RFLP analizę kitiems šeimos nariams, būtų galima atskleisti mutanto genų nešiotoją arba nurodyti bendrą ligos riziką. Svarbu pažymėti, kad RFLP technika nėra plačiai naudojama dabar, kai DNR analizei kriminalistikos ir keliose kitose srityse naudojami naujesni, tvirtesni metodai.

Deja, RFLP analizės metodas yra nuobodus ir lėtas. Be to, kad reikia daug mėginio DNR - mėginys paprastai turėtų būti maždaug ketvirtadalio dydžio, tai yra santykinai didelis kiekis DNR mėginių - procesas nuo zondo žymėjimo iki plovimo ir autoradiografijos gali užtrukti visą mėnesį baigta.

Žmogaus genomo projekto rezultatai beveik pakeitė RFLP poreikį. Projektas leido nustatyti visą žmogaus ląstelėse rastos DNR seką, žmogaus genomą ir identifikuoti visus žmogaus genomo genus.