TAE buferis yra tirpalas, sudarytas iš Tris bazės, acto rūgšties ir EDTA (Tris-acetato-EDTA). Tai istoriškai yra labiausiai paplitęs agarozės gelio buferis elektroforezė atliekant DNR produktų analizę PGR stiprinimas, DNR valymo protokolai arba DNR klonavimas eksperimentai.
Šis buferis turi mažą jonų stiprumą ir mažą buferio tūrį. Jis geriausiai tinka didelių (> 20 kilobazių) DNR gabalų elektroforezei ir jį reikės dažnai keisti arba recirkuliuoti ilgesniam (> 4 val.) Gelio veikimo laikui. Atsižvelgdami į tai, galbūt norėsite apsvarstyti galimybę sudaryti kelias buferio dalis.
Atsižvelgiant į tai, kad buferį lengva padaryti ir veiksmus galima atlikti greitai, sudaryti daugiau nei vieną partiją vienu metu neturėtų būti ypač daug laiko reikalaujanti ar sudėtinga. Vadovaujantis žemiau pateiktomis instrukcijomis, TAE buferio pagaminimas turėtų užtrukti vos 30 minučių.
Ko jums reikia TAE buferiui
Kadangi norint sukurti TAE buferį reikia tik greitų ir paprastų instrukcijų, tai reikalingas medžiagų skaičius nėra didelis. Jums tereikės EDTA (etilendiamintetraacto rūgšties) dinatrio druskos, Tris bazės ir ledinės acto rūgšties.
Buferiui gaminti taip pat reikia pH matuoklio ir atitinkamai kalibravimo standartų. Jums taip pat reikės 600 mililitrų ir 1500 mililitrų stiklinių ar kolbų, taip pat graduotų cilindrų. Galiausiai jums reikės dejonizuoto vandens, išmaišykite strypus ir išmaišykite lėkštes.
Tolesnėse instrukcijose formulės svoris (kiekvieno elemento atominė masė yra padauginta iš atomų skaičiaus, tada kiekvieno elemento masė sudedama) yra sutrumpinta kaip FW.
Paruoškite atsarginį EDTA tirpalą
Iš anksto paruoštas EDTA sprendimas. EDTA visiškai nevirs tirpalu, kol pH nebus sureguliuotas iki maždaug 8,0. Už 500 mililitrų atsargas 0,5 M (molinis arba koncentracijos) EDTA tirpalas pasveriama 93,05 g EDTA dinatrio druskos (FW = 372,2). Ištirpinkite jį 400 mililitrų dejonizuoto vandens ir sureguliuokite pH natrio hidroksidu (NaOH). Tirpalas papildomas iki 500 mililitrų tūrio.
Sukurkite savo akcijų sprendimą
Padarykite koncentruotą (50x) pradinį TAE tirpalą, pasverdami 242 gramus Tris bazės (FW = 121,14) ir ištirpindami jį maždaug 750 mililitrų dejonizuoto vandens. Atsargiai įpilkite 57,1 mililitro ledinės rūgšties ir 100 mililitrų 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Po to tirpalas sureguliuojamas iki galutinio 1 litro tūrio. Šį pradinį tirpalą galima laikyti kambario temperatūroje. Šio buferio pH nėra koreguojamas ir turėtų būti apie 8,5.
Paruoškite darbinį TAE buferio tirpalą
Darbinis 1x TAE buferio tirpalas gaunamas paprasčiausiai praskiedžiant pradinį tirpalą 50x dejonizuotame vandenyje. Galutinės tirpių koncentracijos yra 40 mM (milimoliniai) Tris-acetato ir 1 mM EDTA. Dabar buferis paruoštas naudoti agarozės geliui tepti.
Apvyniokite
Prieš pradėdami tikrinti inventorių, įsitikinkite, kad turite visas aukščiau išvardytas medžiagas, skirtas TAE buferiui. Tiekimo personalas turėtų galėti pasakyti, ar jų sandėlyje yra visos jums reikalingos prekės. Jūs nenorite, kad procedūros viduryje kažko trūktų.